Zellkultur
Rechner für die Zellaussaat
Wählen Sie die Platte oder Flasche, geben Sie Ihre Zellkonzentration und die Aussaatdichte ein und erhalten Sie die Zellzahl pro Well, wie viel Zellsuspension und Medium Sie mischen müssen und was in jedes Well kommt. Die Wachstumsflächen gängiger Gefäße sind voreingetragen und bleiben bearbeitbar, weil sie sich zwischen Herstellern etwas unterscheiden.
So funktioniert die Aussaatberechnung
Zellen pro Well = Dichte × Fläche · Suspension = Zellen pro Well × Wells ÷ Konzentration · Medium = Volumen pro Well × Wells − Suspension
Rechenbeispiel: Eine 96-Well-Platte soll mit 20.000 Zellen/cm² aus einer Suspension mit 1 × 10⁶ Zellen/mL beimpft werden, 100 µL pro Well, mit 10 % Zuschlag. Jedes Well hat 0,32 cm², also 6.400 Zellen pro Well. 96 Wells × 1,1 = 105,6 Wells: 675.840 Zellen, das sind 0,676 mL Suspension. Das Gesamtvolumen beträgt 10,56 mL, geben Sie also 9,88 mL Medium hinzu, mischen Sie und geben Sie 100 µL in jedes Well.
Ist schon die Suspension allein mehr als das Endvolumen, ist die Stammsuspension für diese Dichte zu stark verdünnt: Zentrifugieren Sie die Zellen ab, resuspendieren Sie sie in weniger Medium und zählen Sie erneut.
Wachstumsflächen und typische Volumina
| Gefäß | Wachstumsfläche | Medium | Typische Aussaat (HeLa) |
|---|---|---|---|
| 6-Well-Platte | 9,6 cm² | 1–3 mL | 0,3 × 10⁶ pro Well |
| 12-Well-Platte | 3,5 cm² | 1–2 mL | 0,1 × 10⁶ pro Well |
| 24-Well-Platte | 1,9 cm² | 0,5–1 mL | 0,05 × 10⁶ pro Well |
| 48-Well-Platte | 1,1 cm² | 0,2–0,4 mL | 0,03 × 10⁶ pro Well |
| 96-Well-Platte | 0,32 cm² | 0,1–0,2 mL | 0,01 × 10⁶ pro Well |
| 384-Well-Platte | 0,084 cm² | ~0,08 mL | 0,0018 × 10⁶ pro Well |
| 35- / 60- / 100-mm-Schale | 8,8 / 21,5 / 56,7 cm² | 2 / 5 / 12 mL | 0.3 / 0.8 / 2.2 × 10⁶ |
| T-25- / T-75- / T-175-Flasche | 25 / 75 / 175 cm² | 3–5 / 8–15 / 35–53 mL | 0.7 / 2.1 / 4.9 × 10⁶ |
Werte aus der Referenztabelle für die Zellkultur von Thermo Fisher (Nunc-Gefäße). Andere Marken weichen leicht ab, zum Beispiel hat ein Corning-6-Well 9,5 cm²; das Flächenfeld oben ist bearbeitbar. Die richtige Dichte hängt von der Zelllinie ab und davon, wann die Kultur Konfluenz erreichen soll; betrachten Sie die HeLa-Werte daher als Ausgangspunkt.
Gleichmäßig aussäen
- Zählen Sie unmittelbar vor der Aussaat mit einem Hämozytometer oder einem automatischen Zellzähler und verwenden Sie die Konzentration der lebenden Zellen.
- Halten Sie die Mischung in Suspension: Schwenken oder pipettieren Sie sie zwischen den Reihen, denn Zellen setzen sich innerhalb von Minuten ab.
- Lassen Sie eine frisch beimpfte Platte vor dem Inkubator 15–30 Minuten flach bei Raumtemperatur stehen, um eine Anhäufung am Rand zu verringern.
- Für die Bildgebung nehmen Sie einige Felder pro Well auf und prüfen die Dichte anhand der Bilder: Bei einem kalibrierten Bild ergeben sich die Zellen pro mm² direkt aus einer Zählung.
Fragen
Wie berechne ich die Zellen pro Well?
Multiplizieren Sie die Aussaatdichte in Zellen pro cm² mit der Wachstumsfläche eines Wells. Ein Well einer 96-Well-Platte hat etwa 0,32 cm², 20.000 Zellen/cm² ergeben also 6.400 Zellen pro Well.
Wie viel Zellsuspension brauche ich?
Insgesamt benötigte Zellen ÷ Zellkonzentration. Für 96 Wells mit je 6.400 Zellen (plus 10 % Zuschlag) aus 1 × 10⁶ Zellen/mL sind das 675.840 ÷ 1.000.000 ≈ 0,68 mL, mit Medium auf das Endvolumen aufgefüllt.
Ist das dasselbe wie C1V1 = C2V2?
Ja. Der Rechner löst C1 × V1 = C2 × V2 für Zellen: C1 ist die Konzentration Ihrer Stammsuspension, C2 die Konzentration der Aussaatmischung (Zellen pro Well ÷ Volumen pro Well), V2 das Gesamtvolumen und V1 die zu entnehmende Suspension.
Wie groß ist die Fläche eines Wells einer 96-Well-Platte?
Etwa 0,32 cm² für ein Standard-Well mit flachem Boden (Thermo Fisher und Corning geben beide 0,32 cm² an); 96-Well-Platten mit halber Fläche haben etwa 0,16 cm².
Ist dieser Rechner kostenlos?
Ja. Er läuft in Ihrem Browser und sendet nichts irgendwohin. SlideScope, die Desktop-App für Mikroskopie vom selben Team, ist eine kostenpflichtige App mit kostenloser Beispielbibliothek (alle Werkzeuge) und einem Abonnement für Ihre eigenen Bilder.
Quellen
Die Ergebnisse sind theoretisch bzw. rein rechnerisch; gleichen Sie sie mit der Dokumentation Ihres Geräts ab, bevor Sie sich bei klinischen oder regulierten Arbeiten darauf verlassen.
Messen Sie an Ihren echten Bildern
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