Zellzählung
Hämozytometer-Rechner
Geben Sie ein, was Sie in der Zählkammer gezählt haben, und erhalten Sie Zellkonzentration, Viabilität, Gesamtzellzahl und die Menge an Suspension, die Sie entnehmen müssen. Der Rechner funktioniert für die Netze der Neubauer-improved-, Bürker- und Fuchs-Rosenthal-Kammer, für jedes gezählte Quadrat und für jede Verdünnung, einschließlich der üblichen 1:1-Mischung mit Trypanblau.
So funktioniert die Hämozytometer-Formel
Jedes Quadrat des Zählnetzes fasst ein bekanntes Volumen: seine Fläche mal die Tiefe der Kammer. Bei einer Neubauer-improved-Kammer misst ein Großquadrat 1 mm × 1 mm und die Kammer ist 0,1 mm tief, sodass ein Großquadrat 0,1 mm³ fasst, also 0,1 µL oder 10⁻⁴ mL. Teilt man die mittlere Zählung pro Quadrat durch dieses Volumen, erhält man Zellen pro mL; die Multiplikation mit der Verdünnung gleicht den zugegebenen Farbstoff oder Puffer aus.
Zellen/mL = (N ÷ Quadrate) ÷ (Fläche mm² × Tiefe mm) × 1000 × Verdünnung
Rechenbeispiel: 200 lebende Zellen in den 4 Eckquadraten, 1:1 mit Trypanblau gemischt. 200 ÷ 4 = 50 Zellen pro Quadrat; 50 × 10⁴ × 2 = 1,0 × 10⁶ lebende Zellen/mL. Bei zusätzlich 10 toten Zellen beträgt die Viabilität 200 ÷ 210 = 95,2 %. Um 500.000 Zellen auszusäen, entnehmen Sie 500.000 ÷ 1.000.000 = 0,5 mL.
Zählregeln für ein verlässliches Ergebnis
- Randregel: Zählen Sie Zellen, die die obere und linke Linie eines Quadrats berühren, und lassen Sie die aus, die die untere und rechte Linie berühren, damit keine Zelle doppelt gezählt wird.
- Genügend Zellen zählen: Der Zählfehler folgt einer Poisson-Verteilung und beträgt etwa 1/√N. 100 Zellen ergeben rund ±10 %, 400 Zellen etwa ±5 %. Zählen Sie bei geringer Dichte mehr Quadrate oder beide Kammern.
- Dichte Proben verdünnen: Enthält ein Großquadrat mehr als etwa 100 Zellen, überlappen sich die Zellen und werden übersehen. Verdünnen Sie, zählen Sie erneut und geben Sie den neuen Verdünnungsfaktor ein.
- Trypanblau: Eine 1:1-Mischung mit 0,4 % Trypanblau entspricht einem Verdünnungsfaktor von 2. Zählen Sie innerhalb weniger Minuten, denn lebende Zellen beginnen den Farbstoff aufzunehmen, und die Viabilität sinkt, je länger sie darin stehen.
- Vor dem Befüllen mischen: Zellen setzen sich im Röhrchen innerhalb von Sekunden ab; pipettieren Sie auf und ab und befüllen Sie die Kammer dann in einem gleichmäßigen Zug, ohne sie zu überfüllen.
Welches Quadrat haben Sie gezählt?
| Kammer und Quadrat | Fläche | Tiefe | Volumen pro Quadrat | Faktor (× Zählung pro Quadrat) |
|---|---|---|---|---|
| Neubauer improved oder Bürker, Großquadrat | 1 mm² | 0.1 mm | 0,1 µL | 10⁴ |
| Neubauer improved, eines der 25 Mittelquadrate | 0,04 mm² | 0.1 mm | 4 nL | 2.5 × 10⁵ |
| Neubauer improved, kleinstes Quadrat | 0,0025 mm² | 0.1 mm | 0,25 nL | 4 × 10⁶ |
| Fuchs-Rosenthal, 1-mm-Quadrat | 1 mm² | 0.2 mm | 0,2 µL | 5 × 10³ |
Der Faktor gilt pro gezählter Zelle je Quadrat, vor der Verdünnung. Einweg-Zählkammern übernehmen meist das Neubauer-improved-Netz bei 0,1 mm Tiefe; prüfen Sie im Zweifel den Beipackzettel der Kammer.
Stattdessen Zellen in Bildern zählen
Ein Hämozytometer zählt Zellen in Suspension. Um Zellkerne oder Zellen in einer Mikroskopaufnahme oder einem ganzen Präparat zu zählen, nutzen Sie Bildanalyse: Analyze Particles in Fiji, QuPath, CellProfiler oder SlideScope, das Zellkerne und Zellen ohne Programmierung auf Ihrem eigenen Computer zählt und die Dichte pro mm² anhand der Kalibrierung des Bildes angibt. Siehe wie Sie Zellen in Mikroskopiebildern zählen.
Fragen
Wie berechnet man Zellen pro mL mit einem Hämozytometer?
Bilden Sie den Mittelwert der Zählung pro Quadrat, teilen Sie ihn durch das Volumen eines Quadrats (Fläche × Tiefe, bei einem Neubauer-Großquadrat 1 mm × 1 mm × 0,1 mm = 10⁻⁴ mL) und multiplizieren Sie mit dem Verdünnungsfaktor. Für Neubauer-Großquadrate ergibt das Mittelwert pro Quadrat × 10⁴ × Verdünnung.
Wie hoch ist der Verdünnungsfaktor mit Trypanblau?
Das Mischen gleicher Volumina Zellsuspension und Trypanblau (zum Beispiel 10 µL + 10 µL) halbiert die Konzentration, der Verdünnungsfaktor ist also 2. Eine Mischung aus 1 Teil Zellen und 4 Teilen Farbstoff ergibt einen Faktor von 5.
Wie berechnet man die Zellviabilität?
Viabilität (%) = lebende Zellen ÷ (lebende + tote Zellen) × 100. Bei Trypanblau bleiben lebende Zellen klar, tote Zellen färben sich blau.
Wie viele Quadrate sollte ich zählen?
Zählen Sie so viele Quadrate, dass Sie mindestens 100 Zellen erreichen, idealerweise 200 bis 400; der Fehler beträgt etwa 1/√N. Für die meisten Kulturen genügen die vier großen Eckquadrate; dünn besiedelte Proben brauchen alle neun oder beide Kammern.
Warum mit 10.000 multiplizieren?
Ein Großquadrat einer Neubauer-Kammer fasst 0,1 µL (1 mm × 1 mm × 0,1 mm = 0,1 mm³). In 1 mL passen 10.000 solcher Volumina, also gilt: Zellen pro Quadrat × 10.000 = Zellen pro mL.
Ist dieser Rechner kostenlos?
Ja. Er läuft in Ihrem Browser und sendet nichts irgendwohin. SlideScope, die Desktop-App für Mikroskopie vom selben Team, ist eine kostenpflichtige App mit kostenloser Beispielbibliothek (alle Werkzeuge) und einem Abonnement für Ihre eigenen Bilder.
Quellen
- Abcam — Counting cells using a hemocytometer (Zellzählung mit einem Hämozytometer)
- Thermo Fisher — Useful numbers for cell culture (Nützliche Zahlen für die Zellkultur)
Die Ergebnisse sind theoretisch bzw. rein rechnerisch; gleichen Sie sie mit der Dokumentation Ihres Geräts ab, bevor Sie sich bei klinischen oder regulierten Arbeiten darauf verlassen.
Messen Sie an Ihren echten Bildern
SlideScope öffnet 34 Formate von Mikroskopen und Slide-Scannern, darunter CZI, ND2, SVS und LIF, mit ihrer eigenen Kalibrierung, sodass Längen, Flächen, Zellzahlen und Maßstabsbalken ohne jede Einrichtung in µm ausgegeben werden. Testen Sie alle Werkzeuge kostenlos an den mitgelieferten Beispielen; zum Öffnen Ihrer eigenen Bilder benötigen Sie ein Abonnement. Schon entschieden? Jetzt abonnieren.