Conteo de células
Calculadora de hemocitómetro
Ingresa lo que contaste en la cámara y obtén la concentración celular, la viabilidad, el número total de células y cuánta suspensión debes tomar. Funciona con las cuadrículas de Neubauer mejorada, Bürker y Fuchs-Rosenthal, con cualquier cuadrado que hayas contado y con cualquier dilución, incluida la mezcla habitual 1:1 con azul tripano.
Cómo funciona la fórmula del hemocitómetro
Cada cuadrado de la cuadrícula de conteo contiene un volumen conocido: su área por la profundidad de la cámara. En una cámara de Neubauer mejorada, un cuadrado grande mide 1 mm × 1 mm y la cámara tiene 0.1 mm de profundidad, así que un cuadrado grande contiene 0.1 mm³, es decir, 0.1 µL o 10⁻⁴ mL. Al dividir el conteo promedio por cuadrado entre ese volumen se obtienen las células por mL; al multiplicar por la dilución se compensa el colorante o el buffer que agregaste.
células/mL = (N ÷ cuadrados) ÷ (área mm² × profundidad mm) × 1000 × dilución
Ejemplo resuelto: 200 células vivas en los 4 cuadrados de las esquinas, mezcladas 1:1 con azul tripano. 200 ÷ 4 = 50 células por cuadrado; 50 × 10⁴ × 2 = 1.0 × 10⁶ células vivas/mL. Si además hay 10 células muertas, la viabilidad es 200 ÷ 210 = 95.2 %. Para sembrar 500,000 células, toma 500,000 ÷ 1,000,000 = 0.5 mL.
Reglas de conteo para que el número sea confiable
- Regla de los bordes: cuenta las células que tocan las líneas superior e izquierda de un cuadrado y omite las que tocan las líneas inferior y derecha, para que ninguna célula se cuente dos veces.
- Cuenta suficientes células: el error de conteo sigue una distribución de Poisson, aproximadamente 1/√N. 100 células dan alrededor de ±10 %, 400 células alrededor de ±5 %. Cuenta más cuadrados, o ambas cámaras, cuando la densidad es baja.
- Diluye las muestras muy concentradas: si un cuadrado grande contiene más de unas 100 células, las células se superponen y se pasan por alto. Diluye, vuelve a contar e ingresa el nuevo factor de dilución.
- Azul tripano: una mezcla 1:1 con azul tripano al 0.4 % equivale a un factor de dilución de 2. Cuenta en pocos minutos, porque las células vivas empiezan a captar el colorante y la viabilidad baja cuanto más tiempo pasan en él.
- Mezcla antes de cargar: las células se sedimentan en el tubo en segundos; pipetea hacia arriba y hacia abajo, y luego llena la cámara con un solo movimiento suave, sin rebosarla.
¿Qué cuadrado contaste?
| Cámara y cuadrado | Área | Profundidad | Volumen por cuadrado | Factor (× conteo por cuadrado) |
|---|---|---|---|---|
| Neubauer mejorada o Bürker, cuadrado grande | 1 mm² | 0.1 mm | 0.1 µL | 10⁴ |
| Neubauer mejorada, uno de los 25 cuadrados centrales | 0.04 mm² | 0.1 mm | 4 nL | 2.5 × 10⁵ |
| Neubauer mejorada, cuadrado más pequeño | 0.0025 mm² | 0.1 mm | 0.25 nL | 4 × 10⁶ |
| Fuchs-Rosenthal, cuadrado de 1 mm | 1 mm² | 0.2 mm | 0.2 µL | 5 × 10³ |
El factor es por célula contada por cuadrado, antes de la dilución. Las cámaras de conteo desechables suelen copiar la cuadrícula de Neubauer mejorada con 0.1 mm de profundidad; si tienes dudas, revisa el inserto de la cámara.
Contar células en imágenes
Un hemocitómetro cuenta células en suspensión. Para contar núcleos o células en una micrografía o en una lámina completa, usa análisis de imágenes: Analyze Particles de Fiji, QuPath, CellProfiler o SlideScope, que cuenta núcleos y células en tu propia computadora sin código e informa la densidad por mm² a partir de la calibración de la imagen. Consulta cómo contar células en imágenes de microscopía.
Preguntas
¿Cómo se calculan las células por mL con un hemocitómetro?
Promedia el conteo por cuadrado, divídelo entre el volumen de un cuadrado (área × profundidad; para un cuadrado grande de Neubauer, 1 mm × 1 mm × 0.1 mm = 10⁻⁴ mL) y multiplícalo por el factor de dilución. Para los cuadrados grandes de Neubauer eso es promedio por cuadrado × 10⁴ × dilución.
¿Cuál es el factor de dilución con azul tripano?
Mezclar volúmenes iguales de suspensión celular y azul tripano (por ejemplo 10 µL + 10 µL) reduce la concentración a la mitad, así que el factor de dilución es 2. Una mezcla de 1 parte de células por 4 partes de colorante es un factor de 5.
¿Cómo se calcula la viabilidad celular?
Viabilidad (%) = células vivas ÷ (células vivas + muertas) × 100. Con azul tripano, las células vivas se ven claras y las muertas se tiñen de azul.
¿Cuántos cuadrados debo contar?
Cuenta suficientes cuadrados para llegar a por lo menos 100 células, idealmente de 200 a 400; el error es aproximadamente 1/√N. Para la mayoría de cultivos bastan los cuatro cuadrados grandes de las esquinas; las muestras poco densas necesitan los nueve o ambas cámaras.
¿Por qué se multiplica por 10,000?
Un cuadrado grande de una cámara de Neubauer contiene 0.1 µL (1 mm × 1 mm × 0.1 mm = 0.1 mm³). En 1 mL caben 10,000 de esos volúmenes, así que células por cuadrado × 10,000 = células por mL.
¿Esta calculadora es gratuita?
Sí. Funciona en tu navegador y no envía nada a ninguna parte. SlideScope, la aplicación de microscopía de escritorio creada por el mismo equipo, es una aplicación de pago con una biblioteca de muestras gratuita (con todas las herramientas) y una suscripción para tus propias imágenes.
Fuentes
Los resultados son teóricos o aritméticos; compáralos con la documentación de tu instrumento antes de confiar en ellos para trabajo clínico o regulado.
Mide en tus imágenes reales
SlideScope abre 34 formatos de microscopio y de escáner de láminas, entre ellos CZI, ND2, SVS y LIF, con su propia calibración, así que las longitudes, áreas, conteos de células y barras de escala salen en µm sin configurar nada. Prueba gratis todas las herramientas con las muestras incluidas; abrir tus propias imágenes requiere una suscripción. ¿Ya lo decidiste? Suscríbete ahora.