Penghitungan sel
Kalkulator hemositometer
Masukkan hasil hitungan Anda pada bilik hitung dan dapatkan konsentrasi sel, viabilitas, jumlah total sel, serta berapa banyak suspensi yang perlu diambil. Kalkulator ini berlaku untuk grid Neubauer improved, Bürker, dan Fuchs-Rosenthal, untuk kotak mana pun yang Anda hitung, dan untuk pengenceran berapa pun, termasuk campuran trypan blue 1:1 yang umum.
Cara kerja rumus hemositometer
Setiap kotak pada grid hitung menampung volume yang diketahui: luasnya dikalikan kedalaman bilik. Pada bilik Neubauer improved, kotak besar berukuran 1 mm × 1 mm dan kedalaman bilik 0,1 mm, sehingga satu kotak besar menampung 0,1 mm³, yaitu 0,1 µL atau 10⁻⁴ mL. Membagi rata-rata hitungan per kotak dengan volume tersebut menghasilkan sel per mL; mengalikannya dengan pengenceran mengoreksi pewarna atau buffer yang Anda tambahkan.
sel/mL = (N ÷ kotak) ÷ (luas mm² × kedalaman mm) × 1000 × pengenceran
Contoh perhitungan: 200 sel hidup pada 4 kotak sudut, dicampur 1:1 dengan trypan blue. 200 ÷ 4 = 50 sel per kotak; 50 × 10⁴ × 2 = 1,0 × 10⁶ sel hidup/mL. Jika ada juga 10 sel mati, viabilitasnya 200 ÷ 210 = 95,2 %. Untuk menyemai 500.000 sel, ambil 500.000 ÷ 1.000.000 = 0,5 mL.
Aturan penghitungan agar hasilnya akurat
- Aturan tepi: hitung sel yang menyentuh garis atas dan kiri sebuah kotak dan lewati sel yang menyentuh garis bawah dan kanan, sehingga tidak ada sel yang terhitung dua kali.
- Hitung sel dalam jumlah cukup: galat penghitungan mengikuti distribusi Poisson, sekitar 1/√N. 100 sel memberikan kira-kira ±10 %, 400 sel sekitar ±5 %. Hitung lebih banyak kotak, atau kedua bilik, bila kepadatannya rendah.
- Encerkan sampel yang padat: jika satu kotak besar berisi lebih dari sekitar 100 sel, sel-sel akan tumpang tindih dan terlewat. Encerkan, hitung ulang, lalu masukkan faktor pengenceran yang baru.
- Trypan blue: campuran 1:1 dengan trypan blue 0,4 % berarti faktor pengenceran 2. Hitung dalam beberapa menit, karena sel hidup mulai menyerap pewarna dan viabilitas turun semakin lama sel dibiarkan.
- Campur sebelum memuat: sel mengendap di dalam tabung dalam hitungan detik; pipet naik-turun, lalu isi bilik dengan satu gerakan mulus tanpa mengisi berlebihan.
Kotak mana yang Anda hitung?
| Bilik dan kotak | Luas | Kedalaman | Volume per kotak | Faktor (× hitungan per kotak) |
|---|---|---|---|---|
| Neubauer improved atau Bürker, kotak besar | 1 mm² | 0.1 mm | 0,1 µL | 10⁴ |
| Neubauer improved, salah satu dari 25 kotak tengah | 0,04 mm² | 0.1 mm | 4 nL | 2.5 × 10⁵ |
| Neubauer improved, kotak terkecil | 0,0025 mm² | 0.1 mm | 0,25 nL | 4 × 10⁶ |
| Fuchs-Rosenthal, kotak 1 mm | 1 mm² | 0.2 mm | 0,2 µL | 5 × 10³ |
Faktor ini berlaku per sel yang dihitung per kotak, sebelum pengenceran. Slide hitung sekali pakai biasanya meniru grid Neubauer improved dengan kedalaman 0,1 mm; periksa lembar petunjuk slide bila ragu.
Menghitung sel pada citra
Hemositometer menghitung sel dalam suspensi. Untuk menghitung inti sel atau sel pada mikrograf atau whole slide, gunakan analisis citra: Analyze Particles di Fiji, QuPath, CellProfiler, atau SlideScope, yang menghitung inti sel dan sel di komputer Anda sendiri tanpa kode dan melaporkan kepadatan per mm² berdasarkan kalibrasi citra. Lihat cara menghitung sel pada citra mikroskopi.
Pertanyaan
Bagaimana cara menghitung sel per mL dari hemositometer?
Rata-ratakan hitungan per kotak, bagi dengan volume satu kotak (luas × kedalaman; untuk kotak besar Neubauer 1 mm × 1 mm × 0,1 mm = 10⁻⁴ mL), lalu kalikan dengan faktor pengenceran. Untuk kotak besar Neubauer, rumusnya menjadi rata-rata per kotak × 10⁴ × pengenceran.
Berapa faktor pengenceran dengan trypan blue?
Mencampur suspensi sel dan trypan blue dengan volume sama (misalnya 10 µL + 10 µL) membuat konsentrasinya menjadi setengah, sehingga faktor pengencerannya 2. Campuran 1 bagian sel dengan 4 bagian pewarna berarti faktor 5.
Bagaimana cara menghitung viabilitas sel?
Viabilitas (%) = sel hidup ÷ (sel hidup + sel mati) × 100. Dengan trypan blue, sel hidup tetap bening dan sel mati terwarnai biru.
Berapa banyak kotak yang harus saya hitung?
Hitung kotak secukupnya hingga mencapai minimal 100 sel, idealnya 200 hingga 400; galatnya sekitar 1/√N. Untuk sebagian besar kultur, empat kotak besar di sudut sudah cukup; sampel yang jarang memerlukan kesembilan kotak atau kedua bilik.
Mengapa dikalikan 10.000?
Satu kotak besar pada bilik Neubauer menampung 0,1 µL (1 mm × 1 mm × 0,1 mm = 0,1 mm³). Ada 10.000 volume seperti itu dalam 1 mL, sehingga sel per kotak × 10.000 = sel per mL.
Apakah kalkulator ini gratis?
Ya. Kalkulator ini berjalan di browser Anda dan tidak mengirim apa pun ke mana pun. SlideScope, aplikasi mikroskopi desktop buatan tim yang sama, adalah aplikasi berbayar dengan pustaka sampel gratis (semua alat) dan langganan untuk citra Anda sendiri.
Sumber
Hasilnya bersifat teoretis atau aritmetis; periksa terhadap dokumentasi instrumen Anda sebelum mengandalkannya untuk pekerjaan klinis atau yang diatur regulasi.
Ukur pada citra Anda yang sebenarnya
SlideScope membuka 34 format mikroskop dan pemindai slide, di antaranya CZI, ND2, SVS, dan LIF, dengan kalibrasinya sendiri, sehingga panjang, luas, jumlah sel, dan skala batang langsung keluar dalam µm tanpa pengaturan apa pun. Coba semua alat secara gratis pada sampel bawaan; membuka citra Anda sendiri memerlukan langganan. Sudah memutuskan? Berlangganan sekarang.