血球计数板公式的原理
计数格中的每个方格都对应一个已知体积：方格面积乘以计数室深度。在改良型 Neubauer 计数板上，一个大方格为 1 mm × 1 mm，计数室深 0.1 mm，因此一个大方格的体积为 0.1 mm³，即 0.1 µL 或 10⁻⁴ mL。用每个方格的平均计数除以该体积即得到每 mL 细胞数；再乘以稀释倍数，即可抵消所加染料或缓冲液的稀释作用。
细胞数/mL = (N ÷ 方格数) ÷ (面积 mm² × 深度 mm) × 1000 × 稀释倍数
计算示例：4 个角部方格中共计 200 个活细胞，与台盼蓝 1:1 混合。200 ÷ 4 = 每方格 50 个细胞；50 × 10⁴ × 2 = 1.0 × 10⁶ 个活细胞/mL。若另有 10 个死细胞，活率为 200 ÷ 210 = 95.2 %。如需接种 500,000 个细胞，吸取 500,000 ÷ 1,000,000 = 0.5 mL。
让计数结果可靠的计数规则
- 边线规则：计入压在方格上边线和左边线上的细胞，不计压在下边线和右边线上的细胞，这样就不会重复计数。
- 计数足够多的细胞：计数误差服从泊松分布，约为 1/√N。计数 100 个细胞误差约为 ±10 %，400 个细胞约为 ±5 %。密度较低时，请多计几个方格，或两个计数室都计数。
- 稀释过密的样本：如果一个大方格内的细胞超过约 100 个，细胞会相互重叠而被漏计。请稀释后重新计数，并输入新的稀释倍数。
- 台盼蓝：与 0.4 % 台盼蓝 1:1 混合，稀释倍数为 2。请在几分钟内完成计数，因为活细胞会开始摄取染料，放置时间越长，活率越低。
- 上样前混匀：细胞在管中几秒钟内就会沉降；请用移液器反复吹打，然后一次平稳地加满计数室，不要溢出。
您计数的是哪种方格？
| 计数板与方格 | 面积 | 深度 | 每方格体积 | 系数（× 每方格计数） |
|---|---|---|---|---|
| 改良型 Neubauer 或 Bürker，大方格 | 1 mm² | 0.1 mm | 0.1 µL | 10⁴ |
| 改良型 Neubauer，25 个中央方格之一 | 0.04 mm² | 0.1 mm | 4 nL | 2.5 × 10⁵ |
| 改良型 Neubauer，最小方格 | 0.0025 mm² | 0.1 mm | 0.25 nL | 4 × 10⁶ |
| Fuchs-Rosenthal，1 mm 方格 | 1 mm² | 0.2 mm | 0.2 µL | 5 × 10³ |
该系数针对每个方格中计数的每个细胞，尚未乘以稀释倍数。一次性计数板通常沿用深度 0.1 mm 的改良型 Neubauer 计数格；如有疑问，请查看计数板的说明书。
改为在图像中计数细胞
血球计数板用于计数悬液中的细胞。如需计数显微照片或整张切片中的细胞核或细胞，请使用图像分析：Fiji 的 Analyze Particles、QuPath、CellProfiler，或 SlideScope。SlideScope 无需编写代码即可在您自己的电脑上计数细胞核和细胞，并根据图像的校准信息给出每 mm² 的密度。请参阅如何在显微镜图像中计数细胞。
常见问题
如何根据血球计数板计算每 mL 细胞数？
求出每个方格的平均计数，除以一个方格的体积（面积 × 深度；Neubauer 大方格为 1 mm × 1 mm × 0.1 mm = 10⁻⁴ mL），再乘以稀释倍数。对于 Neubauer 大方格，即每方格平均数 × 10⁴ × 稀释倍数。
使用台盼蓝时稀释倍数是多少？
将等体积的细胞悬液与台盼蓝混合（例如 10 µL + 10 µL）会使浓度减半，因此稀释倍数为 2。1 份细胞与 4 份染料混合时，稀释倍数为 5。
如何计算细胞活率？
活率 (%) = 活细胞数 ÷ (活细胞数 + 死细胞数) × 100。使用台盼蓝时，活细胞保持透亮，死细胞被染成蓝色。
应该计数多少个方格？
计数足够多的方格，使细胞总数至少达到 100 个，最好为 200 到 400 个；误差约为 1/√N。对于大多数培养物，计数四个角部大方格就足够了；稀疏样本需要计数全部九个大方格或两个计数室。
为什么要乘以 10,000？
Neubauer 计数板的一个大方格体积为 0.1 µL（1 mm × 1 mm × 0.1 mm = 0.1 mm³）。1 mL 中有 10,000 个这样的体积，因此每方格细胞数 × 10,000 = 每 mL 细胞数。
这个计算器免费吗？
是的。它在您的浏览器中运行，不会向任何地方发送数据。SlideScope 是同一团队开发的桌面显微镜应用，它是一款付费应用，附带免费示例库（包含所有工具），打开您自己的图像需要订阅。
资料来源
结果为理论值或算术结果；在用于临床或受监管的工作之前，请对照您的仪器文档进行核对。
在您的真实图像上测量
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