Cellen tellen
Hemocytometer-calculator
Vul in wat je in de telkamer hebt geteld en krijg de celconcentratie, de viabiliteit, het totale aantal cellen en hoeveel suspensie je moet nemen. Het werkt voor de verbeterde Neubauer-, Bürker- en Fuchs-Rosenthal-telkamer, voor elk vierkant dat je hebt geteld en voor elke verdunning, inclusief de gebruikelijke 1:1-menging met trypaanblauw.
Zo werkt de hemocytometerformule
Elk vierkant van het telraster bevat een bekend volume: het oppervlak maal de diepte van de telkamer. Op een verbeterde Neubauer-telkamer is een groot vierkant 1 mm × 1 mm en is de kamer 0,1 mm diep, dus een groot vierkant bevat 0,1 mm³, oftewel 0,1 µL of 10⁻⁴ mL. Deel je het gemiddelde aantal per vierkant door dat volume, dan krijg je cellen per mL; door te vermenigvuldigen met de verdunning maak je de toegevoegde kleurstof of buffer ongedaan.
cellen/mL = (N ÷ vierkanten) ÷ (oppervlak mm² × diepte mm) × 1000 × verdunning
Uitgewerkt voorbeeld: 200 levende cellen in de 4 hoekvierkanten, 1:1 gemengd met trypaanblauw. 200 ÷ 4 = 50 cellen per vierkant; 50 × 10⁴ × 2 = 1,0 × 10⁶ levende cellen/mL. Met daarnaast 10 dode cellen is de viabiliteit 200 ÷ 210 = 95,2 %. Om 500.000 cellen uit te zaaien, neem je 500.000 ÷ 1.000.000 = 0,5 mL.
Telregels die het getal eerlijk houden
- Randregel: tel cellen die de bovenste en linker lijn van een vierkant raken en sla cellen over die de onderste en rechter lijn raken, zodat geen enkele cel twee keer wordt geteld.
- Tel genoeg cellen: de telfout volgt Poisson, ongeveer 1/√N. 100 cellen geeft ruwweg ±10 %, 400 cellen ongeveer ±5 %. Tel meer vierkanten, of beide kamers, als de dichtheid laag is.
- Verdun drukke monsters: als een groot vierkant meer dan ongeveer 100 cellen bevat, overlappen cellen en worden ze gemist. Verdun, tel opnieuw en vul de nieuwe verdunningsfactor in.
- Trypaanblauw: een 1:1-menging met 0,4 % trypaanblauw is een verdunningsfactor van 2. Tel binnen een paar minuten, want levende cellen beginnen de kleurstof op te nemen en de viabiliteit daalt naarmate ze langer staan.
- Meng voor het laden: cellen zakken binnen enkele seconden uit in de buis; pipetteer op en neer en vul de telkamer daarna in één vloeiende beweging zonder te overvullen.
Welk vierkant heb je geteld?
| Telkamer en vierkant | Oppervlak | Diepte | Volume per vierkant | Factor (× aantal per vierkant) |
|---|---|---|---|---|
| Verbeterde Neubauer of Bürker, groot vierkant | 1 mm² | 0.1 mm | 0,1 µL | 10⁴ |
| Verbeterde Neubauer, één van de 25 middelste vierkanten | 0,04 mm² | 0.1 mm | 4 nL | 2.5 × 10⁵ |
| Verbeterde Neubauer, kleinste vierkant | 0,0025 mm² | 0.1 mm | 0,25 nL | 4 × 10⁶ |
| Fuchs-Rosenthal, vierkant van 1 mm | 1 mm² | 0.2 mm | 0,2 µL | 5 × 10³ |
De factor geldt per getelde cel per vierkant, vóór de verdunning. Wegwerptelkamers volgen meestal het verbeterde Neubauer-raster met een diepte van 0,1 mm; kijk bij twijfel in de bijsluiter van de telkamer.
Cellen in beelden tellen
Een hemocytometer telt cellen in suspensie. Om kernen of cellen in een microscopiefoto of een hele coupe te tellen, gebruik je beeldanalyse: Analyze Particles in Fiji, QuPath, CellProfiler of SlideScope, dat kernen en cellen op je eigen computer telt zonder code en de dichtheid per mm² rapporteert op basis van de kalibratie van het beeld. Lees hoe je cellen telt in microscopiebeelden.
Vragen
Hoe bereken je cellen per mL met een hemocytometer?
Neem het gemiddelde aantal per vierkant, deel dat door het volume van één vierkant (oppervlak × diepte; voor een groot Neubauer-vierkant 1 mm × 1 mm × 0,1 mm = 10⁻⁴ mL) en vermenigvuldig met de verdunningsfactor. Voor grote Neubauer-vierkanten is dat gemiddelde per vierkant × 10⁴ × verdunning.
Wat is de verdunningsfactor met trypaanblauw?
Als je gelijke volumes celsuspensie en trypaanblauw mengt (bijvoorbeeld 10 µL + 10 µL), halveert de concentratie, dus de verdunningsfactor is 2. Een menging van 1 deel cellen op 4 delen kleurstof is een factor 5.
Hoe bereken je de viabiliteit van cellen?
Viabiliteit (%) = levende cellen ÷ (levende + dode cellen) × 100. Met trypaanblauw blijven levende cellen helder en kleuren dode cellen blauw.
Hoeveel vierkanten moet ik tellen?
Tel genoeg vierkanten om op minstens 100 cellen uit te komen, idealiter 200 tot 400; de fout is ongeveer 1/√N. Voor de meeste kweken zijn de vier grote hoekvierkanten genoeg; voor dunne monsters heb je alle negen of beide kamers nodig.
Waarom vermenigvuldigen met 10.000?
Eén groot vierkant van een Neubauer-telkamer bevat 0,1 µL (1 mm × 1 mm × 0,1 mm = 0,1 mm³). In 1 mL gaan 10.000 van die volumes, dus cellen per vierkant × 10.000 = cellen per mL.
Is deze calculator gratis?
Ja. Hij draait in je browser en stuurt nergens iets naartoe. SlideScope, de desktopapp voor microscopie van hetzelfde team, is een betaalde app met een gratis voorbeeldbibliotheek (elke tool) en een abonnement voor je eigen beelden.
Bronnen
De resultaten zijn theoretisch of rekenkundig; controleer ze aan de hand van de documentatie van je instrument voordat je erop vertrouwt voor klinisch of gereguleerd werk.
Meet op je echte beelden
SlideScope opent 34 formaten van microscopen en slidescanners, waaronder CZI, ND2, SVS en LIF, met hun eigen kalibratie, zodat lengtes, oppervlakken, celtellingen en schaalbalken in µm uitkomen zonder dat je iets hoeft in te stellen. Probeer elke tool gratis op de ingebouwde voorbeelden; voor het openen van je eigen beelden heb je een abonnement nodig. Al besloten? Nu abonneren.