血球計數盤公式的原理
計數格線的每個方格都有已知的體積：面積乘以計數盤的深度。在改良式 Neubauer 計數盤上，一個大方格為 1 mm × 1 mm，計數盤深 0.1 mm，因此一個大方格容納 0.1 mm³，也就是 0.1 µL 或 10⁻⁴ mL。將每方格平均計數除以這個體積即得每 mL 細胞數；再乘以稀釋倍數，便可抵銷您加入的染劑或緩衝液。
細胞數/mL =（N ÷ 方格數）÷（面積 mm² × 深度 mm）× 1000 × 稀釋倍數
計算範例：在 4 個角落方格中共計數到 200 個活細胞，樣本以 1:1 與台盼藍混合。200 ÷ 4 = 每方格 50 個細胞；50 × 10⁴ × 2 = 1.0 × 10⁶ 個活細胞/mL。若另有 10 個死細胞，存活率為 200 ÷ 210 = 95.2 %。若要接種 500,000 個細胞，需吸取 500,000 ÷ 1,000,000 = 0.5 mL。
讓數字準確的計數規則
- 邊線規則：計入碰到方格上緣與左緣線的細胞，略過碰到下緣與右緣線的細胞，這樣就不會有細胞被重複計數。
- 計數足夠的細胞：計數誤差符合 Poisson 分布，約為 1/√N。計數 100 個細胞約為 ±10 %，400 個細胞約為 ±5 %。密度偏低時，請計數更多方格或兩個計數槽。
- 稀釋過於密集的樣本：如果一個大方格中超過約 100 個細胞，細胞會重疊而被漏數。請稀釋後重新計數，並輸入新的稀釋倍數。
- 台盼藍：與 0.4 % 台盼藍以 1:1 混合，稀釋倍數為 2。請在幾分鐘內完成計數，因為活細胞會開始吸收染劑，放置越久存活率就越低。
- 載入前先混勻：細胞在幾秒內就會在管中沉降；請用吸管上下吹吸，再以一次平順的動作注滿計數槽，不要過量。
您計數的是哪一種方格？
| 計數盤與方格 | 面積 | 深度 | 每方格體積 | 係數（× 每方格計數） |
|---|---|---|---|---|
| 改良式 Neubauer 或 Bürker，大方格 | 1 mm² | 0.1 mm | 0.1 µL | 10⁴ |
| 改良式 Neubauer，中央 25 個方格之一 | 0.04 mm² | 0.1 mm | 4 nL | 2.5 × 10⁵ |
| 改良式 Neubauer，最小方格 | 0.0025 mm² | 0.1 mm | 0.25 nL | 4 × 10⁶ |
| Fuchs-Rosenthal，1 mm 方格 | 1 mm² | 0.2 mm | 0.2 µL | 5 × 10³ |
此係數是以每方格的計數細胞數計算，尚未乘上稀釋倍數。拋棄式計數片通常沿用深度 0.1 mm 的改良式 Neubauer 格線；如有疑問，請查看計數片的說明書。
改為在影像中計數細胞
血球計數盤計數的是懸浮液中的細胞。若要在顯微照片或全玻片影像中計數細胞核或細胞，請使用影像分析：Fiji 的 Analyze Particles、QuPath、CellProfiler，或 SlideScope；SlideScope 無需撰寫程式碼即可在您自己的電腦上計數細胞核與細胞，並依據影像的校正資訊回報每 mm² 的密度。請參閱如何在顯微影像中計數細胞。
常見問題
如何從血球計數盤計算每 mL 細胞數？
先算出每方格的平均計數，除以一個方格的體積（面積 × 深度；Neubauer 大方格為 1 mm × 1 mm × 0.1 mm = 10⁻⁴ mL），再乘以稀釋倍數。以 Neubauer 大方格而言，即為每方格平均數 × 10⁴ × 稀釋倍數。
使用台盼藍時的稀釋倍數是多少？
將等體積的細胞懸浮液與台盼藍混合（例如 10 µL + 10 µL）會使濃度減半，因此稀釋倍數為 2。若以 1 份細胞對 4 份染劑混合，稀釋倍數為 5。
如何計算細胞存活率？
存活率（%）= 活細胞數 ÷（活細胞數 + 死細胞數）× 100。使用台盼藍時，活細胞保持透明，死細胞則染成藍色。
應該計數多少個方格？
計數足夠的方格，至少達到 100 個細胞，理想為 200 到 400 個；誤差約為 1/√N。大多數培養樣本計數四個角落大方格即已足夠；稀疏的樣本則需計數全部九個方格或兩個計數槽。
為什麼要乘以 10,000？
Neubauer 計數盤的一個大方格容納 0.1 µL（1 mm × 1 mm × 0.1 mm = 0.1 mm³）。1 mL 中有 10,000 個這樣的體積，因此每方格細胞數 × 10,000 = 每 mL 細胞數。
這個計算器是免費的嗎？
是的。它在您的瀏覽器中執行，不會將任何資料傳送到任何地方。SlideScope 是同一團隊開發的桌面顯微影像應用程式，為付費應用程式，附有免費範例庫（所有工具皆可使用），開啟您自己的影像則需要訂閱。
資料來源
結果為理論值或算術結果；用於臨床或受法規管制的工作之前，請先與儀器的說明文件核對。
在您的真實影像上量測
SlideScope 可開啟 34 種顯微鏡與玻片掃描器格式，包括 CZI、ND2、SVS 與 LIF，並沿用檔案本身的校正資訊，因此長度、面積、細胞計數與比例尺都直接以 µm 呈現，無需任何設定。可在內建範例上免費試用所有工具；開啟您自己的影像需要訂閱。已經決定了嗎？立即訂閱。