Comptage cellulaire
Calculateur d’hémocytomètre
Saisissez ce que vous avez compté dans la cellule de comptage et obtenez la concentration cellulaire, la viabilité, le nombre total de cellules et le volume de suspension à prélever. Le calculateur fonctionne pour les grilles Neubauer améliorée, Bürker et Fuchs-Rosenthal, pour n’importe quel carré compté et pour n’importe quelle dilution, y compris le mélange habituel 1:1 au bleu trypan.
Comment fonctionne la formule de l’hémocytomètre
Chaque carré de la grille de comptage contient un volume connu : sa surface multipliée par la profondeur de la cellule. Sur une cellule de Neubauer améliorée, un grand carré mesure 1 mm × 1 mm et la cellule a une profondeur de 0,1 mm : un grand carré contient donc 0,1 mm³, soit 0,1 µL ou 10⁻⁴ mL. Diviser le comptage moyen par carré par ce volume donne les cellules par mL ; multiplier par la dilution compense le colorant ou le tampon ajouté.
cellules/mL = (N ÷ carrés) ÷ (surface mm² × profondeur mm) × 1000 × dilution
Exemple détaillé : 200 cellules vivantes sur les 4 carrés d’angle, mélange 1:1 avec du bleu trypan. 200 ÷ 4 = 50 cellules par carré ; 50 × 10⁴ × 2 = 1,0 × 10⁶ cellules vivantes/mL. Avec en plus 10 cellules mortes, la viabilité est de 200 ÷ 210 = 95,2 %. Pour ensemencer 500 000 cellules, prélevez 500 000 ÷ 1 000 000 = 0,5 mL.
Règles de comptage pour un résultat fiable
- Règle des bords : comptez les cellules qui touchent les lignes du haut et de gauche d’un carré et ignorez celles qui touchent les lignes du bas et de droite, afin qu’aucune cellule ne soit comptée deux fois.
- Comptez assez de cellules : l’erreur de comptage suit une loi de Poisson, environ 1/√N. 100 cellules donnent environ ±10 %, 400 cellules environ ±5 %. Comptez davantage de carrés, ou les deux chambres, quand la densité est faible.
- Diluez les échantillons trop denses : si un grand carré contient plus d’une centaine de cellules, elles se chevauchent et certaines sont manquées. Diluez, recomptez et saisissez le nouveau facteur de dilution.
- Bleu trypan : un mélange 1:1 avec du bleu trypan à 0,4 % correspond à un facteur de dilution de 2. Comptez dans les quelques minutes, car les cellules vivantes commencent à absorber le colorant et la viabilité baisse à mesure que l’attente se prolonge.
- Mélangez avant de charger : les cellules sédimentent dans le tube en quelques secondes ; pipetez de haut en bas, puis remplissez la cellule d’un seul geste régulier, sans la faire déborder.
Quel carré avez-vous compté ?
| Cellule et carré | Surface | Profondeur | Volume par carré | Facteur (× comptage par carré) |
|---|---|---|---|---|
| Neubauer améliorée ou Bürker, grand carré | 1 mm² | 0.1 mm | 0,1 µL | 10⁴ |
| Neubauer améliorée, l’un des 25 carrés centraux | 0,04 mm² | 0.1 mm | 4 nL | 2.5 × 10⁵ |
| Neubauer améliorée, plus petit carré | 0,0025 mm² | 0.1 mm | 0,25 nL | 4 × 10⁶ |
| Fuchs-Rosenthal, carré de 1 mm | 1 mm² | 0.2 mm | 0,2 µL | 5 × 10³ |
Le facteur s’applique par cellule comptée par carré, avant la dilution. Les lames de comptage jetables reprennent généralement la grille de Neubauer améliorée à 0,1 mm de profondeur ; en cas de doute, consultez la notice de la lame.
Compter plutôt les cellules sur des images
Un hémocytomètre compte des cellules en suspension. Pour compter des noyaux ou des cellules sur une micrographie ou une lame entière, utilisez l’analyse d’image : Analyze Particles de Fiji, QuPath, CellProfiler ou SlideScope, qui compte les noyaux et les cellules sur votre propre ordinateur, sans code, et indique la densité par mm² à partir de l’étalonnage de l’image. Consultez comment compter les cellules dans des images de microscopie.
Questions
Comment calculer le nombre de cellules par mL avec un hémocytomètre ?
Faites la moyenne du comptage par carré, divisez par le volume d’un carré (surface × profondeur ; pour un grand carré de Neubauer, 1 mm × 1 mm × 0,1 mm = 10⁻⁴ mL) et multipliez par le facteur de dilution. Pour les grands carrés de Neubauer, cela donne moyenne par carré × 10⁴ × dilution.
Quel est le facteur de dilution avec le bleu trypan ?
Mélanger des volumes égaux de suspension cellulaire et de bleu trypan (par exemple 10 µL + 10 µL) divise la concentration par deux : le facteur de dilution est donc de 2. Un mélange de 1 volume de cellules pour 4 volumes de colorant correspond à un facteur de 5.
Comment calculer la viabilité cellulaire ?
Viabilité (%) = cellules vivantes ÷ (cellules vivantes + mortes) × 100. Avec le bleu trypan, les cellules vivantes restent claires et les cellules mortes se colorent en bleu.
Combien de carrés dois-je compter ?
Comptez assez de carrés pour atteindre au moins 100 cellules, idéalement 200 à 400 ; l’erreur est d’environ 1/√N. Pour la plupart des cultures, les quatre grands carrés d’angle suffisent ; les échantillons peu denses nécessitent les neuf carrés ou les deux chambres.
Pourquoi multiplier par 10 000 ?
Un grand carré d’une cellule de Neubauer contient 0,1 µL (1 mm × 1 mm × 0,1 mm = 0,1 mm³). 1 mL contient 10 000 de ces volumes : cellules par carré × 10 000 = cellules par mL.
Ce calculateur est-il gratuit ?
Oui. Il s’exécute dans votre navigateur et n’envoie rien nulle part. SlideScope, l’application de microscopie de bureau conçue par la même équipe, est une application payante avec une bibliothèque d’échantillons gratuite (tous les outils) et un abonnement pour vos propres images.
Sources
Les résultats sont théoriques ou arithmétiques ; vérifiez-les par rapport à la documentation de votre instrument avant de vous y fier pour un travail clinique ou réglementé.
Mesurez sur vos vraies images
SlideScope ouvre 34 formats de microscopes et de scanners de lames, dont CZI, ND2, SVS et LIF, avec leur propre étalonnage : longueurs, surfaces, comptages de cellules et barres d’échelle sont donnés en µm sans aucun réglage. Essayez gratuitement tous les outils sur les échantillons intégrés ; pour ouvrir vos propres images, il faut un abonnement. Déjà décidé ? Abonnez-vous maintenant.